熒光定量PCR實驗時的好方法

實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材：96孔光學反應板配合光學膜，0.2ml光學八聯反應管配合光學膜，0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家，例如在使用單管或者8連管做實驗時，如果在樣本數量不多的時候，建議在樣品加熱塊（TRAY）上對稱的安放樣品，并且先放在第6列或者第7列，然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜，每個反應管的受力和受熱都比較均勻，提高了孔與孔之間的數據精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候，建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜，然后在橫向，后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開發，采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩定性測試。
7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。